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研究级的分光光度计定量分析条件的选择

发布时间:2022-06-22      点击次数:62
  研究级的分光光度计是实验室普及率高的一种光谱仪器,由于灵敏度高、选择性好、准确度高、适用浓度范围广,长期在分析领域扮演很重要的角色。
 
  紫外光谱通常是以吸收曲线的形式表示。纵坐标为吸收强度(ε)用lgε表示,也有用吸光度(A)或透光率T表示。横坐标多用波长(λ)表示,单位为nm。当化合物的大吸收在某波长位置时,则波长用λmax表示。对于同一物质,浓度不同时,各波长处的吸光度值不一样。但吸收曲线相似,大吸收波长不变。
 
  研究级的分光光度计用来测量待测物质对可见光或紫外光(200~760nm)的吸光度并进行定量分析的仪器。可以测定核酸和蛋白的浓度,也可以测定细菌细胞密度,紫外分光光度计又可分为单光束,假双光束,双光束。它们的用途又有区别。
 
  单光束:适于在给定波长处测量吸光度或透光度,一般不能作全波段光谱扫描,要求光源和检测器具有很高的稳定性。
 
  双光束:自动记录,快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响,特别适合于结构分析。仪器复杂,价格较高。
 
  假双光束也就是比例双光束,它的原理是由同一单色器发出的光被分成两束,一束直接到达检测器,另一束通过样品后到达另一个检测器。这种仪器的优点是可以监测光源变化带来的误差,但是并不能消除参比造成的影响。
 
  定量分析条件的选择:
 
  1、测量波长的选择:一般选用待测物质的大吸收波长作为测量波长(入射光);但当在大吸收波长处有干扰时,则应根据“吸收大干扰小”的原则来选择波长。
 
  2、控制适当的吸光度范围:由测量误差可知,当吸光度在0.2~0.8之间时,测量误差小,所以应尽量控制吸光度在此范围进行测定。控制的方法为:控制溶液的浓度;选用适当厚度的比色皿。

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