研究级的分光光度计定量分析条件的选择

　　研究级的分光光度计是实验室普及率高的一种光谱仪器，由于灵敏度高、选择性好、准确度高、适用浓度范围广，长期在分析领域扮演很重要的角色。

 

　　紫外光谱通常是以吸收曲线的形式表示。纵坐标为吸收强度（ε）用lgε表示，也有用吸光度（A）或透光率T表示。横坐标多用波长（λ）表示，单位为nm。当化合物的大吸收在某波长位置时，则波长用λmax表示。对于同一物质，浓度不同时，各波长处的吸光度值不一样。但吸收曲线相似，大吸收波长不变。

 

　　研究级的分光光度计用来测量待测物质对可见光或紫外光（200～760nm）的吸光度并进行定量分析的仪器。可以测定核酸和蛋白的浓度，也可以测定细菌细胞密度，紫外分光光度计又可分为单光束，假双光束，双光束。它们的用途又有区别。

 

　　单光束：适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。

 

　　双光束：自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。

 

　　假双光束也就是比例双光束，它的原理是由同一单色器发出的光被分成两束，一束直接到达检测器，另一束通过样品后到达另一个检测器。这种仪器的优点是可以监测光源变化带来的误差，但是并不能消除参比造成的影响。

 

　　定量分析条件的选择：

 

　　1、测量波长的选择：一般选用待测物质的大吸收波长作为测量波长（入射光）；但当在大吸收波长处有干扰时，则应根据“吸收大干扰小”的原则来选择波长。

 

　　2、控制适当的吸光度范围：由测量误差可知，当吸光度在0.2～0.8之间时，测量误差小，所以应尽量控制吸光度在此范围进行测定。控制的方法为：控制溶液的浓度；选用适当厚度的比色皿。